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实时荧光定量PCR仪有哪些结构组成?

更新时间:2022-09-20      点击次数:1764
实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)也称 QPCR,是指在DNA 扩增反应中,以荧光化学物质测单次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。

实时荧光定量PCR主要由样品载台、基因扩增热循环组件、微量荧光检测光学系统、微电路控制系统、计算机及应用软件组成。其中基因扩增热循环组件工作原理与传统基因扩增仪大致相同,不同厂家不同型号的产品分别采用空气加热、压缩机制冷、半导体加热制冷等工作方式。微量荧光检测系统由荧光激发光学部件、微量荧光检测部件、光路、控制系统组成。

常用的荧光激发方式有两种:卤钨灯和LED;荧光检测元件常用两种方式:光电倍增管和冷光CCD摄像机,光单色元件有滤光片和光栅。在实时PCR扩增过程中,荧光信号被收集,转化为成为扩增和熔解曲线。具体数据就是基线,荧光阈值和Ct值。

CT值: qPCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时的所对应的扩增循环数(Cycle Threshold)。
基线:扩增曲线的水平部分(背景信号过高,可独立设置)
在PCR早期,扩增处于理想情况下,循环数较少,产物积累少,产生荧光的水平不能与荧光本底背景明显地区别,之后荧光的产生增加进入指数期。
可以在PCR反应刚处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,以此作为“一定产物量”,并且由此来推断模板最初的含量。一定产物量对应的荧光信号强度,也就是荧光阈值。
 





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