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常见的核酸提取方法介绍

更新时间:2022-08-15      点击次数:3471
核酸作为基因表达的物质基础,是分子生物学研究的主要对象。无论是进行核酸的结构还是功能研究,首先都需要对核酸进行提取和纯化。核酸提取为大量广泛研究和应用提供了基础。常见的核酸提取方法有:

1、酚/氯仿抽提法

1956年发明,通过酚/氯仿处理细胞破碎液或者组织匀浆后,在水相中主要溶解以DNA为主的核酸成分,在有机相中主要是脂类物质,蛋白质位于两相之间。酚/氯仿抽提的优势是成本低,对实验条件要求较低。提取的DNA保持天然状态。获得的DNA纯度高、片段大、效果好,缺点是操作较为繁琐。

2、醇沉淀法

乙醇能够消除核酸的水化层,使带负电荷的磷酸基团暴露出来,NA﹢等带正电荷离子能与磷酸基团结合,形成沉淀。

3、层析柱法

通过特殊硅基质吸附材料,能够特定吸附DNA,而RNA和蛋白质顺利通过,然后利用高盐低PH结合核酸,低盐高PH值洗脱,来分离纯化核酸。

4、热裂解碱法

碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离他们,在碱性下,变性蛋白是可溶的。

5、煮沸裂解法

加热处理DNA溶液,利用线性DNA分子的特性,通过离心将DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片形成的沉淀分离。煮沸裂解法提取DNA,得量少,杂质多,DNA可能会出现断裂,主要适用于一些粗略的实验。

6、纳米磁珠法

运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA。

7、浓盐法:高盐沉淀法是酚氯仿抽提方法的一个变种,利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者分离。优点事省略了酚氯仿抽提操作的麻烦,并且几乎克服了酚氯仿抽提方法的一切缺点,只是得到DNA的纯度不够稳定。 
 

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