咨询电话

0571-56390366

当前位置:首页  >  技术文章  >  核酸提取的好坏直接影响检测结果的有效性

核酸提取的好坏直接影响检测结果的有效性

更新时间:2023-02-13      点击次数:695
核酸是由许多核酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。核酸是分子生物学的基础,而核酸提取是核酸检测,乃至于整个分子行业绕不过去的门槛,很多时候一份样本的核酸提取的好坏直接决定了检测结果的有效性。

常见核酸提取纯化方法:

1、苯酚氯仿抽提法
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用,用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用 乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃慢慢绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。

2、水抽提法

利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA, 然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液,在上清中加入固体氯化钠调节至2. 6M. 加入2倍体积95%醇,立即用搅拌法搅出,然后分别用66% , 80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,即得DNA样品,此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用,为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS。

3、离心柱纯化

此种方法是利用核酸表面会覆盖一层由水分子构成的薄膜,在高盐环境下,这层亲水膜会遭到破坏从而核酸可被吸附在离心柱上,而其他杂质如蛋白质、代谢产物等则会被离心沉淀与核酸分离。最后通过洗脱,将核酸从吸附膜上脱离,即可得到纯化后的核酸。离心柱纯化也是的试剂盒提取中广泛的使用方法。

4、磁珠法

一般用于自动化提取,生物磁珠是一种新型的功能化固体载体,其表面包被有活性基团,可以与多种生物活性物质发生偶联,兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点,在外磁场的作用下可以定向移动和栠中,当撤去外磁场后,稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中,从而使固液相的分离变的十分快捷方便,通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶向物质。
 

扫码关注

邮箱:support@bigfishgene.com

地址:浙江省杭州市富阳区银湖街道富闲路9号银湖创新中心6号楼

版权所有 ©2024 杭州比格飞序生物科技有限公司 All Rights Reserved    备案号:浙ICP备18015274号-3    sitemap.xml    管理登陆    技术支持:化工仪器网